ขอบคุณที่เข้าชม nature.com เบราว์เซอร์ที่คุณใช้อยู่มีการรองรับ CSS อย่างจำกัด เพื่อประสบการณ์การใช้งานที่ดีที่สุด เราขอแนะนำให้ใช้เบราว์เซอร์เวอร์ชันล่าสุด (หรือปิดโหมดความเข้ากันได้ใน Internet Explorer) นอกจากนี้ เพื่อให้มั่นใจได้ว่าเว็บไซต์นี้จะได้รับการสนับสนุนอย่างต่อเนื่อง เว็บไซต์นี้จะไม่มีสไตล์หรือ JavaScript
เมลามีนเป็นสารปนเปื้อนในอาหารที่ได้รับการยอมรับ ซึ่งอาจพบได้ในอาหารบางประเภททั้งโดยบังเอิญและโดยเจตนา จุดประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อตรวจสอบการตรวจจับและการหาปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและนมผง ตัวอย่างอาหารเชิงพาณิชย์จำนวน 40 ตัวอย่าง ซึ่งรวมถึงนมผงสำหรับทารกและนมผงจากภูมิภาคต่างๆ ของอิหร่าน ได้รับการวิเคราะห์ ปริมาณเมลามีนโดยประมาณของตัวอย่างถูกกำหนดโดยใช้ระบบโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงร่วมกับรังสีอัลตราไวโอเลต (HPLC-UV) มีการสร้างกราฟสอบเทียบ (R2 = 0.9925) สำหรับการตรวจจับเมลามีนในช่วง 0.1–1.2 μg mL−1 ขีดจำกัดการหาปริมาณและการตรวจจับคือ 1 μg mL−1 และ 3 μg mL−1 ตามลำดับ มีการทดสอบปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและนมผง และผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าระดับเมลามีนในตัวอย่างนมผงสำหรับทารกและนมผงอยู่ที่ 0.001–0.095 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม และ 0.001–0.004 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม ตามลำดับ ค่าเหล่านี้เป็นไปตามกฎหมายของสหภาพยุโรปและมาตรฐาน Codex Alimentarius สิ่งสำคัญที่ควรทราบคือ การบริโภคผลิตภัณฑ์นมเหล่านี้ที่มีปริมาณเมลามีนลดลงไม่ได้ก่อให้เกิดความเสี่ยงอย่างมีนัยสำคัญต่อสุขภาพของผู้บริโภค ซึ่งผลการประเมินความเสี่ยงก็สนับสนุนข้อนี้เช่นกัน
เมลามีนเป็นสารประกอบอินทรีย์ที่มีสูตรโมเลกุล C3H6N6 ซึ่งได้มาจากไซยานาไมด์ มีความละลายในน้ำต่ำมากและมีไนโตรเจนประมาณ 66% เมลามีนเป็นสารประกอบทางอุตสาหกรรมที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย มีการใช้งานที่ถูกต้องตามกฎหมายมากมายในการผลิตพลาสติก ปุ๋ย และอุปกรณ์แปรรูปอาหาร (รวมถึงบรรจุภัณฑ์อาหารและเครื่องครัว)1,2 นอกจากนี้ เมลามีนยังใช้เป็นตัวนำส่งยาสำหรับการรักษาโรคต่างๆ สัดส่วนของไนโตรเจนที่สูงในเมลามีนอาจนำไปสู่การใช้สารประกอบนี้ในทางที่ผิดและทำให้คุณสมบัติของโมเลกุลโปรตีนในส่วนผสมอาหาร3,4 ดังนั้น การเติมเมลามีนลงในผลิตภัณฑ์อาหาร รวมถึงผลิตภัณฑ์นม จะเพิ่มปริมาณไนโตรเจน ส่งผลให้สรุปผิดพลาดว่าปริมาณโปรตีนในนมสูงกว่าที่เป็นจริง
เมลามีนทุกกรัมที่เติมลงไปจะทำให้ปริมาณโปรตีนในอาหารเพิ่มขึ้น 0.4% อย่างไรก็ตาม เมลามีนละลายน้ำได้ดีมากและอาจก่อให้เกิดอันตรายร้ายแรงได้ การเติมเมลามีน 1.3 กรัมลงในผลิตภัณฑ์เหลว เช่น นม สามารถเพิ่มปริมาณโปรตีนในนมได้ถึง 30%5,6 แม้ว่าเมลามีนจะถูกเติมลงในอาหารของสัตว์และแม้แต่อาหารของมนุษย์เพื่อเพิ่มปริมาณโปรตีน7 แต่คณะกรรมการ Codex Alimentarius (CAC) และหน่วยงานระดับชาติยังไม่รับรองเมลามีนเป็นสารเติมแต่งอาหาร และได้ระบุว่าเป็นอันตรายหากกลืน สูดดม หรือดูดซึมผ่านผิวหนัง ในปี 2555 องค์การอนามัยโลก (WHO) โดยหน่วยงานระหว่างประเทศเพื่อการวิจัยโรคมะเร็งได้จัดให้เมลามีนเป็นสารก่อมะเร็งประเภท 2B เนื่องจากอาจเป็นอันตรายต่อสุขภาพของมนุษย์8 การสัมผัสเมลามีนในระยะยาวอาจทำให้เกิดมะเร็งหรือความเสียหายต่อไต2 เมลามีนในอาหารสามารถรวมตัวกับกรดไซยานูริกเพื่อสร้างผลึกสีเหลืองที่ไม่ละลายน้ำ ซึ่งอาจก่อให้เกิดความเสียหายต่อเนื้อเยื่อไตและกระเพาะปัสสาวะ รวมถึงมะเร็งทางเดินปัสสาวะและน้ำหนักลดได้9,10 นอกจากนี้ยังสามารถทำให้เกิดอาหารเป็นพิษเฉียบพลัน และหากมีความเข้มข้นสูงอาจถึงแก่ชีวิตได้ โดยเฉพาะในทารกและเด็กเล็ก11 องค์การอนามัยโลก (WHO) ได้กำหนดปริมาณเมลามีนที่ยอมรับได้ต่อวัน (TDI) สำหรับมนุษย์ไว้ที่ 0.2 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมน้ำหนักตัวต่อวัน โดยอิงตามแนวทางของ CAC12 สำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาแห่งสหรัฐอเมริกา (US FDA) ได้กำหนดระดับสารตกค้างสูงสุดของเมลามีนไว้ที่ 1 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมในนมผงสำหรับทารก และ 2.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมในอาหารอื่นๆ2,7 ในเดือนกันยายน พ.ศ. 2551 มีรายงานว่าผู้ผลิตนมผงสำหรับทารกในประเทศหลายรายได้เติมเมลามีนลงในนมผงเพื่อเพิ่มปริมาณโปรตีนในผลิตภัณฑ์ ส่งผลให้เกิดการเป็นพิษจากนมผงและก่อให้เกิดเหตุการณ์อาหารเป็นพิษจากเมลามีนทั่วประเทศที่ทำให้เด็กป่วยมากกว่า 294,000 คน และเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลมากกว่า 50,000 คน 13
การให้นมบุตรไม่ใช่เรื่องที่ทำได้เสมอไปเนื่องจากปัจจัยต่างๆ เช่น ความยากลำบากในการใช้ชีวิตในเมือง การเจ็บป่วยของมารดาหรือบุตร ซึ่งนำไปสู่การใช้สูตรนมผงเพื่อเลี้ยงทารก ส่งผลให้มีการจัดตั้งโรงงานผลิตนมผงที่มีส่วนประกอบใกล้เคียงกับนมแม่มากที่สุด¹⁴ นมผงที่วางขายในท้องตลาดมักทำจากนมวัวและมักทำด้วยส่วนผสมพิเศษของไขมัน โปรตีน คาร์โบไฮเดรต วิตามิน แร่ธาตุ และสารประกอบอื่นๆ เพื่อให้ใกล้เคียงกับนมแม่ ปริมาณโปรตีนและไขมันในนมผงจึงแตกต่างกันไป และขึ้นอยู่กับชนิดของนม อาจมีการเสริมสารประกอบต่างๆ เช่น วิตามินและแร่ธาตุ เช่น ธาตุเหล็ก¹⁵ เนื่องจากทารกเป็นกลุ่มที่อ่อนไหวและมีความเสี่ยงต่อการเป็นพิษ ความปลอดภัยของการบริโภคนมผงจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อสุขภาพ หลังจากกรณีการเป็นพิษจากเมลามีนในทารกชาวจีน ประเทศต่างๆ ทั่วโลกได้ให้ความสนใจกับปัญหานี้อย่างใกล้ชิด และความอ่อนไหวในด้านนี้ก็เพิ่มมากขึ้น ดังนั้น การเสริมสร้างการควบคุมการผลิตนมผงจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งเพื่อปกป้องสุขภาพของทารก มีวิธีการต่างๆ มากมายสำหรับการตรวจหาเมลามีนในอาหาร รวมถึงโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) อิเล็กโทรโฟเรซิส วิธีการทางประสาทสัมผัส สเปกโทรโฟโตเมตรี และการทดสอบอิมมูโนซอร์เบนต์แบบเชื่อมโยงแอนติเจน-แอนติบอดี16 ในปี 2550 องค์การอาหารและยาของสหรัฐอเมริกา (FDA) ได้พัฒนาและเผยแพร่วิธีการ HPLC สำหรับการกำหนดปริมาณเมลามีนและกรดไซยานูริกในอาหาร ซึ่งเป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดในการกำหนดปริมาณเมลามีน17
ความเข้มข้นของเมลามีนในนมผงสำหรับทารกที่วัดโดยใช้เทคนิคสเปกโทรสโกปีอินฟราเรดแบบใหม่ มีค่าตั้งแต่ 0.33 ถึง 0.96 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม (mg kg-1) 18 การศึกษาในศรีลังกาพบว่าระดับเมลามีนในนมผงเต็มไขมันมีค่าตั้งแต่ 0.39 ถึง 0.84 mg kg-1 นอกจากนี้ ตัวอย่างนมผงสำหรับทารกที่นำเข้ามีระดับเมลามีนสูงที่สุด โดยมีค่า 0.96 และ 0.94 mg/kg ตามลำดับ ระดับเหล่านี้ต่ำกว่าขีดจำกัดตามกฎระเบียบ (1 mg/kg) แต่จำเป็นต้องมีโปรแกรมการตรวจสอบเพื่อความปลอดภัยของผู้บริโภค 19
มีการศึกษาหลายชิ้นที่ตรวจสอบระดับเมลามีนในนมผงสำหรับทารกของอิหร่าน พบว่าประมาณ 65% ของตัวอย่างมีเมลามีน โดยมีค่าเฉลี่ย 0.73 มิลลิกรัม/กิโลกรัม และสูงสุด 3.63 มิลลิกรัม/กิโลกรัม อีกการศึกษาหนึ่งรายงานว่าระดับเมลามีนในนมผงสำหรับทารกมีช่วงตั้งแต่ 0.35 ถึง 3.40 ไมโครกรัม/กิโลกรัม โดยมีค่าเฉลี่ย 1.38 ไมโครกรัม/กิโลกรัม โดยรวมแล้ว การตรวจพบและระดับของเมลามีนในนมผงสำหรับทารกของอิหร่านได้รับการประเมินในการศึกษาต่างๆ และพบว่าตัวอย่างบางส่วนมีเมลามีนเกินขีดจำกัดสูงสุดที่กำหนดโดยหน่วยงานกำกับดูแล (2.5 มิลลิกรัม/กิโลกรัม/มื้อ)
เนื่องจากมีการบริโภคนมผงทั้งทางตรงและทางอ้อมในปริมาณมากในอุตสาหกรรมอาหาร และนมผงสำหรับทารกมีความสำคัญเป็นพิเศษในการเลี้ยงดูเด็ก งานวิจัยนี้จึงมีจุดมุ่งหมายเพื่อตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการตรวจหาเมลามีนในนมผงและนมผงสำหรับทารก โดยวัตถุประสงค์แรกของงานวิจัยนี้คือการพัฒนาวิธีการตรวจวัดปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและนมผงที่รวดเร็ว ง่าย และแม่นยำ โดยใช้เทคนิคโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) และการตรวจจับด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) และวัตถุประสงค์ที่สองคือการตรวจสอบปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและนมผงที่จำหน่ายในตลาดอิหร่าน
เครื่องมือที่ใช้ในการวิเคราะห์เมลามีนจะแตกต่างกันไปตามสถานที่ผลิตอาหาร วิธีการวิเคราะห์ HPLC-UV ที่มีความไวและเชื่อถือได้ถูกนำมาใช้ในการวัดปริมาณเมลามีนตกค้างในนมและนมผงสำหรับทารก ผลิตภัณฑ์นมมีโปรตีนและไขมันหลายชนิดที่อาจรบกวนการวัดเมลามีน ดังนั้น ตามที่ Sun et al. 22 ระบุไว้ จำเป็นต้องมีกลยุทธ์การทำความสะอาดที่เหมาะสมและมีประสิทธิภาพก่อนการวิเคราะห์ด้วยเครื่องมือ ในการศึกษาครั้งนี้ เราใช้ตัวกรองแบบเข็มฉีดยาแบบใช้แล้วทิ้ง และใช้คอลัมน์ C18 ในการแยกเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและนมผง รูปที่ 1 แสดงโครมาโตแกรมสำหรับการตรวจจับเมลามีน นอกจากนี้ การฟื้นตัวของตัวอย่างที่มีเมลามีน 0.1–1.2 มก./กก. อยู่ในช่วง 95% ถึง 109% สมการการถดถอยคือ y = 1.2487x − 0.005 (r = 0.9925) และค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD) อยู่ในช่วง 0.8 ถึง 2% ข้อมูลที่มีอยู่แสดงให้เห็นว่าวิธีการนี้มีความน่าเชื่อถือในช่วงความเข้มข้นที่ศึกษา (ตารางที่ 1) ขีดจำกัดการตรวจจับ (LOD) และขีดจำกัดการหาปริมาณ (LOQ) ของเมลามีนด้วยเครื่องมือวัดคือ 1 μg mL−1 และ 3 μg mL−1 ตามลำดับ นอกจากนี้ สเปกตรัม UV ของเมลามีนยังแสดงแถบการดูดกลืนแสงที่ 242 nm วิธีการตรวจวัดมีความไว น่าเชื่อถือ และแม่นยำ วิธีนี้สามารถใช้สำหรับการตรวจวัดระดับเมลามีนในงานประจำได้
ผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกันได้รับการตีพิมพ์โดยผู้เขียนหลายท่าน วิธีการโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงร่วมกับอาร์เรย์โฟโตไดโอด (HPLC) ได้รับการพัฒนาขึ้นสำหรับการวิเคราะห์เมลามีนในผลิตภัณฑ์นม ขีดจำกัดล่างของการหาปริมาณคือ 340 μg kg−1 สำหรับนมผง และ 280 μg kg−1 สำหรับนมผงสำหรับทารกที่ 240 nm Filazzi et al. (2012) รายงานว่าไม่พบเมลามีนในนมผงสำหรับทารกด้วยวิธี HPLC อย่างไรก็ตาม ตัวอย่างนมผง 8% มีเมลามีนในระดับ 0.505–0.86 mg/kg Tittlemiet et al.23 ได้ทำการศึกษาที่คล้ายคลึงกันและกำหนดปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารก (จำนวนตัวอย่าง: 72) โดยใช้โครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงร่วมกับแมสสเปกโทรเมตรี/MS (HPLC-MS/MS) พบว่ามีปริมาณประมาณ 0.0431–0.346 mg kg−1 ในการศึกษาที่ดำเนินการโดย Venkatasamy et al. (2010) ได้ใช้วิธีเคมีสีเขียว (โดยไม่ใช้แอซีโตไนไตรล์) และโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบเฟสผกผัน (RP-HPLC) เพื่อประมาณปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและนมทั่วไป ช่วงความเข้มข้นของตัวอย่างอยู่ระหว่าง 1.0 ถึง 80 กรัม/มิลลิลิตร และการตอบสนองเป็นเส้นตรง (r > 0.999) วิธีการนี้แสดงค่าการคืนตัว 97.2–101.2 ในช่วงความเข้มข้น 5–40 กรัม/มิลลิลิตร และความสามารถในการทำซ้ำน้อยกว่า 1.0% ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ นอกจากนี้ ค่า LOD และ LOQ ที่สังเกตได้คือ 0.1 กรัม/มิลลิลิตร และ 0.2 กรัม/มิลลิลิตร ตามลำดับ Lutter et al. (2011) ได้ทำการตรวจสอบการปนเปื้อนของเมลามีนในนมวัวและนมผงสำหรับทารกโดยใช้ HPLC-UV ความเข้มข้นของเมลามีนอยู่ในช่วง < 0.2 ถึง 2.52 มิลลิกรัม/กิโลกรัม ช่วงไดนามิกเชิงเส้นของวิธี HPLC-UV คือ 0.05 ถึง 2.5 มก./กก. สำหรับนมวัว 0.13 ถึง 6.25 มก./กก. สำหรับนมผงสำหรับทารกที่มีสัดส่วนมวลโปรตีนน้อยกว่า 15% และ 0.25 ถึง 12.5 มก./กก. สำหรับนมผงสำหรับทารกที่มีสัดส่วนมวลโปรตีน 15% ผลลัพธ์ของ LOD (และ LOQ) คือ 0.03 มก./กก. (0.09 มก./กก.) สำหรับนมวัว 0.06 มก./กก. (0.18 มก./กก.) สำหรับนมผงสำหรับทารกที่มีโปรตีนน้อยกว่า 15% และ 0.12 มก./กก. (0.36 มก./กก.) สำหรับนมผงสำหรับทารกที่มีโปรตีน 15% โดยมีอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนเท่ากับ 3 และ 1025 สำหรับ LOD และ LOQ ตามลำดับ Diebes et al. (2012) ได้ทำการศึกษาปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารกและตัวอย่างนมผงโดยใช้ HPLC/DMD ในนมผงสำหรับทารก ระดับต่ำสุดและสูงสุดคือ 9.49 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม และ 258 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม ตามลำดับ ขีดจำกัดการตรวจจับ (LOD) คือ 0.05 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม
Javaid และคณะ รายงานว่าปริมาณสารตกค้างของเมลามีนในนมผงสำหรับทารกอยู่ในช่วง 0.002–2 มก. กก.−1 โดยใช้สเปกโทรสโกปีอินฟราเรดแบบฟูริเยร์ทรานส์ฟอร์ม (FT-MIR) (LOD = 1 มก. กก.−1; LOQ = 3.5 มก. กก.−1) Rezai และคณะ27 เสนอวิธีการ HPLC-DDA (λ = 220 นาโนเมตร) เพื่อประมาณปริมาณเมลามีนและได้ค่า LOQ เท่ากับ 0.08 ไมโครกรัม มล.−1 สำหรับนมผง ซึ่งต่ำกว่าระดับที่ได้ในงานวิจัยนี้ Sun และคณะ พัฒนา RP-HPLC-DAD สำหรับการตรวจหาเมลามีนในนมเหลวโดยการสกัดเฟสของแข็ง (SPE) พวกเขาได้ค่า LOD และ LOQ เท่ากับ 18 และ 60 ไมโครกรัม กก.−128 ตามลำดับ ซึ่งมีความไวมากกว่างานวิจัยปัจจุบัน Montesano และคณะ ยืนยันประสิทธิภาพของวิธี HPLC-DMD สำหรับการประเมินปริมาณเมลามีนในผลิตภัณฑ์เสริมอาหารโปรตีน โดยมีขีดจำกัดการหาปริมาณที่ 0.05–3 มก./กก. ซึ่งมีความไวน้อยกว่าวิธีที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้29
ไม่ต้องสงสัยเลยว่าห้องปฏิบัติการวิเคราะห์มีบทบาทสำคัญในการปกป้องสิ่งแวดล้อมโดยการตรวจสอบมลพิษในตัวอย่างต่างๆ อย่างไรก็ตาม การใช้สารเคมีและตัวทำละลายจำนวนมากในระหว่างการวิเคราะห์อาจส่งผลให้เกิดสารตกค้างที่เป็นอันตราย ดังนั้น เคมีวิเคราะห์สีเขียว (GAC) จึงได้รับการพัฒนาขึ้นในปี 2000 เพื่อลดหรือขจัดผลกระทบด้านลบของกระบวนการวิเคราะห์ต่อผู้ปฏิบัติงานและสิ่งแวดล้อม²⁶ วิธีการตรวจจับเมลามีนแบบดั้งเดิม ได้แก่ โครมาโทกราฟี อิเล็กโทรโฟเรซิส อิเล็กโทรโฟเรซิสแบบแคปิลลารี และเอนไซม์เชื่อมโยงอิมมูโนซอร์เบนต์แอสเซย์ (ELISA) ได้ถูกนำมาใช้เพื่อระบุเมลามีน อย่างไรก็ตาม ในบรรดาวิธีการตรวจจับจำนวนมาก เซนเซอร์ทางเคมีไฟฟ้าได้รับความสนใจอย่างมากเนื่องจากมีความไว ความจำเพาะ เวลาในการวิเคราะห์ที่รวดเร็ว และคุณลักษณะที่เป็นมิตรต่อผู้ใช้^30,31 เทคโนโลยีนาโนสีเขียวใช้กระบวนการทางชีวภาพในการสังเคราะห์วัสดุนาโน ซึ่งสามารถลดการเกิดของเสียอันตรายและการใช้พลังงาน จึงส่งเสริมการนำแนวทางปฏิบัติที่ยั่งยืนมาใช้ ตัวอย่างเช่น นาโนคอมโพสิตที่ทำจากวัสดุที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม สามารถนำมาใช้ในไบโอเซนเซอร์เพื่อตรวจจับสารต่างๆ เช่น เมลามีน32,33,34
การศึกษาแสดงให้เห็นว่าการสกัดไมโครเฟสของแข็ง (SPME) ถูกนำมาใช้อย่างมีประสิทธิภาพเนื่องจากมีประสิทธิภาพด้านพลังงานและความยั่งยืนสูงกว่าเมื่อเทียบกับวิธีการสกัดแบบดั้งเดิม ความเป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมและประสิทธิภาพด้านพลังงานของ SPME ทำให้เป็นทางเลือกที่ยอดเยี่ยมแทนวิธีการสกัดแบบดั้งเดิมในเคมีวิเคราะห์ และเป็นวิธีการเตรียมตัวอย่างที่ยั่งยืนและมีประสิทธิภาพมากขึ้น35
ในปี 2013 Wu และคณะได้พัฒนาไบโอเซนเซอร์แบบเรโซแนนซ์พลาสมอนบนพื้นผิว (mini-SPR) ที่มีความไวและความจำเพาะสูง ซึ่งใช้การจับคู่ระหว่างเมลามีนและแอนติบอดีต่อต้านเมลามีนเพื่อตรวจจับเมลามีนในนมผงสำหรับทารกได้อย่างรวดเร็วโดยใช้อิมมูโนแอสเซย์ ไบโอเซนเซอร์ SPR ที่รวมกับอิมมูโนแอสเซย์ (โดยใช้โปรตีนอัลบูมินจากซีรั่มวัวที่จับกับเมลามีน) เป็นเทคโนโลยีที่ใช้งานง่ายและต้นทุนต่ำ โดยมีขีดจำกัดการตรวจจับเพียง 0.02 μg mL-136
Nasiri และ Abbasian ใช้เซนเซอร์แบบพกพาที่มีศักยภาพสูงร่วมกับสารประกอบกราฟีนออกไซด์-ไคโตซาน (GOCS) เพื่อตรวจจับเมลามีนในตัวอย่างเชิงพาณิชย์37 วิธีนี้แสดงให้เห็นถึงความเลือกจำเพาะ ความแม่นยำ และการตอบสนองที่สูงมาก เซนเซอร์ GOCS แสดงให้เห็นถึงความไวที่โดดเด่น (239.1 μM−1) ช่วงเชิงเส้น 0.01 ถึง 200 μM ค่าคงที่ความสัมพันธ์ 1.73 × 104 และ LOD สูงถึง 10 nM ยิ่งไปกว่านั้น การศึกษาที่ดำเนินการโดย Chandrasekhar และคณะในปี 2024 ได้นำวิธีการที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมและคุ้มค่ามาใช้ พวกเขาใช้สารสกัดจากเปลือกมะละกอเป็นสารลดเพื่อสังเคราะห์อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ (ZnO-NPs) ด้วยวิธีการที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม ต่อมาได้มีการพัฒนาเทคนิคสเปกโทรสโกปีไมโครรามานที่เป็นเอกลักษณ์สำหรับการหาปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารก ZnO-NPs ที่ได้จากของเสียทางการเกษตรได้แสดงให้เห็นถึงศักยภาพในการเป็นเครื่องมือวินิจฉัยที่มีคุณค่าและเทคโนโลยีที่เชื่อถือได้และต้นทุนต่ำสำหรับการตรวจสอบและตรวจจับเมลามีน38
Alizadeh et al. (2024) ใช้แพลตฟอร์มการเรืองแสงของโครงสร้างโลหะอินทรีย์ (MOF) ที่มีความไวสูงในการตรวจหาเมลามีนในนมผง ช่วงเชิงเส้นและขีดจำกัดการตรวจจับต่ำสุดของเซนเซอร์ ซึ่งกำหนดโดยใช้ 3σ/S คือ 40 ถึง 396.45 nM (เทียบเท่ากับ 25 μg kg−1 ถึง 0.25 mg kg−1) และ 40 nM (เทียบเท่ากับ 25 μg kg−1) ตามลำดับ ช่วงนี้ต่ำกว่าระดับสารตกค้างสูงสุด (MRLs) ที่กำหนดไว้สำหรับการระบุเมลามีนในนมผงสำหรับทารก (1 mg kg−1) และตัวอย่างอาหาร/อาหารสัตว์อื่นๆ (2.5 mg kg−1) เซนเซอร์เรืองแสง (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) แสดงให้เห็นถึงความแม่นยำที่สูงกว่าและความสามารถในการวัดที่เที่ยงตรงกว่า HPLC39 ในการตรวจหาเมลามีนในนมผง ไบโอเซนเซอร์และนาโนคอมโพสิตในเคมีสีเขียวไม่เพียงแต่เพิ่มประสิทธิภาพในการตรวจจับเท่านั้น แต่ยังช่วยลดอันตรายต่อสิ่งแวดล้อมให้เหลือน้อยที่สุด สอดคล้องกับหลักการพัฒนาอย่างยั่งยืนอีกด้วย
หลักการเคมีสีเขียวได้ถูกนำมาประยุกต์ใช้กับวิธีการต่างๆ ในการตรวจหาเมลามีน แนวทางหนึ่งคือการพัฒนาวิธีการสกัดแบบไมโครเฟสของแข็งแบบกระจายตัวที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม โดยใช้พอลิเมอร์ขั้วธรรมชาติ β-ไซโคลเดกซ์ทรินที่เชื่อมโยงกับกรดซิตริกเพื่อการสกัดเมลามีนอย่างมีประสิทธิภาพ 40 จากตัวอย่าง เช่น นมผงสำหรับทารกและน้ำร้อน อีกวิธีหนึ่งใช้ปฏิกิริยาแมนนิชในการตรวจหาเมลามีนในตัวอย่างนม วิธีนี้มีราคาไม่แพง เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม และมีความแม่นยำสูง โดยมีช่วงเชิงเส้น 0.1–2.5 ppm และขีดจำกัดการตรวจจับต่ำ 41 นอกจากนี้ ยังมีการพัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพและเป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมสำหรับการตรวจหาเมลามีนเชิงปริมาณในนมเหลวและนมผงสำหรับทารกโดยใช้สเปกโทรสโกปีการส่งผ่านอินฟราเรดแบบฟูริเยร์ทรานส์ฟอร์ม ซึ่งมีความแม่นยำสูงและขีดจำกัดการตรวจจับ 1 ppm และ 3.5 ppm ตามลำดับ 42 วิธีการเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงการประยุกต์ใช้หลักการเคมีสีเขียวในการพัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพและยั่งยืนสำหรับการตรวจหาเมลามีน
งานวิจัยหลายชิ้นได้เสนอวิธีการใหม่สำหรับการตรวจหาเมลามีน เช่น การใช้การสกัดเฟสของแข็งและโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)43 รวมถึงโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบรวดเร็ว (HPLC) ซึ่งไม่จำเป็นต้องมีการเตรียมการล่วงหน้าที่ซับซ้อนหรือสารรีเอเจนต์คู่ไอออน จึงช่วยลดปริมาณของเสียทางเคมี44 วิธีการเหล่านี้ไม่เพียงแต่ให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำสำหรับการตรวจหาเมลามีนในผลิตภัณฑ์นมเท่านั้น แต่ยังสอดคล้องกับหลักการของเคมีสีเขียว ลดการใช้สารเคมีอันตราย และลดผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อมโดยรวมของกระบวนการวิเคราะห์อีกด้วย
ตัวอย่างนมผงสำหรับเด็กจำนวน 40 ตัวอย่างจากหลายยี่ห้อถูกนำมาทดสอบซ้ำ 3 ครั้ง และผลลัพธ์แสดงในตารางที่ 2 ระดับเมลามีนในนมผงสำหรับเด็กและนมผงทั่วไปมีค่าอยู่ในช่วง 0.001 ถึง 0.004 มิลลิกรัม/กิโลกรัม และ 0.001 ถึง 0.095 มิลลิกรัม/กิโลกรัม ตามลำดับ ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างนมผงสำหรับเด็กในกลุ่มอายุทั้งสามกลุ่ม นอกจากนี้ ตรวจพบเมลามีนในนมผง 80% แต่พบว่านมผงสำหรับเด็กปนเปื้อนเมลามีนถึง 65%
ปริมาณเมลามีนในนมผงอุตสาหกรรมสูงกว่าในนมผงสำหรับทารก และความแตกต่างนั้นมีนัยสำคัญ (p<0.05) (รูปที่ 2)
ผลลัพธ์ที่ได้ต่ำกว่าขีดจำกัดที่กำหนดโดย FDA (ต่ำกว่า 1 และ 2.5 มก./กก.) นอกจากนี้ ผลลัพธ์ยังสอดคล้องกับขีดจำกัดที่กำหนดโดย CAC (2010) และ EU45,46 กล่าวคือ ขีดจำกัดสูงสุดที่อนุญาตคือ 1 มก./กก. สำหรับนมผงสำหรับทารก และ 2.5 มก./กก. สำหรับผลิตภัณฑ์นม
จากการศึกษาของ Ghanati et al.47 ในปี 2023 พบว่าปริมาณเมลามีนในนมบรรจุภัณฑ์ชนิดต่างๆ ในอิหร่านมีตั้งแต่ 50.7 ถึง 790 μg kg−1 ซึ่งผลการศึกษาของพวกเขานั้นต่ำกว่าขีดจำกัดที่องค์การอาหารและยา (FDA) กำหนดไว้ ผลการศึกษาของเราต่ำกว่าผลการศึกษาของ Shoder et al.48 และ Rima et al.49 Shoder et al. (2010) พบว่าระดับเมลามีนในนมผง (n=49) ที่ตรวจวัดโดยวิธี ELISA มีตั้งแต่ 0.5 ถึง 5.5 mg/kg Rima et al. วิเคราะห์สารตกค้างของเมลามีนในนมผงโดยใช้สเปกโทรโฟโตเมตรีแบบฟลูออเรสเซนซ์ และพบว่าปริมาณเมลามีนในนมผงอยู่ที่ 0.72–5.76 mg/kg มีการศึกษาในแคนาดาในปี 2011 เพื่อตรวจสอบระดับเมลามีนในนมผงสำหรับทารก (n=94) โดยใช้โครมาโทกราฟีของเหลว (LC/MS) พบว่าความเข้มข้นของเมลามีนต่ำกว่าขีดจำกัดที่ยอมรับได้ (มาตรฐานเบื้องต้น: 0.5 มก. กก.−1) ไม่น่าเป็นไปได้ที่ระดับเมลามีนที่ตรวจพบซึ่งเป็นการปลอมแปลงนั้นเป็นกลยุทธ์ที่ใช้เพื่อเพิ่มปริมาณโปรตีน อย่างไรก็ตาม ไม่สามารถอธิบายได้ด้วยการใช้ปุ๋ย การเคลื่อนย้ายบรรจุภัณฑ์ หรือปัจจัยที่คล้ายคลึงกัน นอกจากนี้ แหล่งที่มาของเมลามีนในนมผงที่นำเข้าสู่แคนาดาไม่ได้ถูกเปิดเผย50
Hassani และคณะ ได้ทำการวัดปริมาณเมลามีนในนมผงและนมเหลวในตลาดอิหร่านในปี 2013 และพบผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกัน ผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่า ยกเว้นนมผงและนมเหลวเพียงยี่ห้อเดียว ตัวอย่างอื่นๆ ทั้งหมดปนเปื้อนด้วยเมลามีน โดยมีระดับตั้งแต่ 1.50 ถึง 30.32 ไมโครกรัมต่อกรัมในนมผง และ 0.11 ถึง 1.48 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตรในนมเหลว ที่น่าสังเกตคือ ไม่พบกรดไซยานูริกในตัวอย่างใดๆ ซึ่งช่วยลดความเป็นไปได้ที่ผู้บริโภคจะได้รับพิษจากเมลามีน 51 การศึกษาในอดีตได้ประเมินความเข้มข้นของเมลามีนในผลิตภัณฑ์ช็อกโกแลตที่มีนมผง ประมาณ 94% ของตัวอย่างนำเข้าและ 77% ของตัวอย่างจากอิหร่านมีเมลามีน ระดับเมลามีนในตัวอย่างนำเข้ามีตั้งแต่ 0.032 ถึง 2.692 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม ในขณะที่ในตัวอย่างจากอิหร่านมีตั้งแต่ 0.013 ถึง 2.600 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม โดยรวมแล้ว ตรวจพบเมลามีนในตัวอย่าง 85% แต่มีเพียงยี่ห้อเดียวเท่านั้นที่มีระดับเกินขีดจำกัดที่อนุญาต44 Tittlemier และคณะ รายงานระดับเมลามีนในนมผงตั้งแต่ 0.00528 ถึง 0.0122 มก./กก.
ตารางที่ 3 สรุปผลการประเมินความเสี่ยงสำหรับกลุ่มอายุทั้งสามกลุ่ม ความเสี่ยงน้อยกว่า 1 ในทุกกลุ่มอายุ ดังนั้น จึงไม่มีความเสี่ยงต่อสุขภาพที่ไม่ก่อให้เกิดมะเร็งจากเมลามีนในนมผงสำหรับทารก
ระดับการปนเปื้อนที่ต่ำในผลิตภัณฑ์นมอาจเกิดจากการปนเปื้อนโดยไม่ได้ตั้งใจในระหว่างการเตรียม ในขณะที่ระดับที่สูงกว่าอาจเกิดจากการเติมสารโดยเจตนา นอกจากนี้ ความเสี่ยงโดยรวมต่อสุขภาพของมนุษย์จากการบริโภคผลิตภัณฑ์นมที่มีระดับเมลามีนต่ำถือว่าต่ำ สรุปได้ว่าการบริโภคผลิตภัณฑ์ที่มีเมลามีนในระดับต่ำดังกล่าวไม่ก่อให้เกิดความเสี่ยงต่อสุขภาพของผู้บริโภค52
เนื่องจากความสำคัญของการจัดการความปลอดภัยด้านอาหารในอุตสาหกรรมนม โดยเฉพาะอย่างยิ่งในแง่ของการปกป้องสุขภาพของประชาชน จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งที่จะต้องพัฒนาและตรวจสอบวิธีการประเมินและเปรียบเทียบระดับและสารตกค้างของเมลามีนในนมผงและนมผงสำหรับทารก วิธีการวิเคราะห์ด้วยเครื่องสเปกโทรโฟโตมิเตอร์ HPLC-UV ที่ง่ายและแม่นยำได้รับการพัฒนาขึ้นเพื่อใช้ในการตรวจวัดเมลามีนในนมผงและนมผงสำหรับทารก วิธีการนี้ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องเพื่อให้มั่นใจในความน่าเชื่อถือและความแม่นยำ ขีดจำกัดการตรวจจับและการหาปริมาณของวิธีการนี้แสดงให้เห็นว่ามีความไวเพียงพอที่จะวัดระดับเมลามีนในนมผงและนมผงสำหรับทารกได้ จากข้อมูลของเรา พบว่าตรวจพบเมลามีนในตัวอย่างส่วนใหญ่จากประเทศอิหร่าน ระดับเมลามีนที่ตรวจพบทั้งหมดต่ำกว่าขีดจำกัดสูงสุดที่อนุญาตโดย CAC ซึ่งบ่งชี้ว่าการบริโภคผลิตภัณฑ์นมประเภทนี้ไม่ก่อให้เกิดความเสี่ยงต่อสุขภาพของมนุษย์
สารเคมีที่ใช้ทั้งหมดเป็นเกรดวิเคราะห์ ได้แก่ เมลามีน (2,4,6-ไตรอะมิโน-1,3,5-ไตรอะซีน) บริสุทธิ์ 99% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); อะซีโตไนไตรล์เกรด HPLC (Merck, Darmstadt, Germany); น้ำบริสุทธิ์พิเศษ (Millipore, Morfheim, France); และตัวกรองแบบใช้แล้วทิ้ง (Chromafil Xtra PVDF-45/25, ขนาดรูพรุน 0.45 μm, เส้นผ่านศูนย์กลางเมมเบรน 25 มม.) (Macherey-Nagel, Düren, Germany)
ใช้เครื่องอัลตราโซนิก (Elma, เยอรมนี), เครื่องเหวี่ยงแยกสาร (Beckman Coulter, Krefeld, เยอรมนี) และเครื่อง HPLC (KNAUER, เยอรมนี) ในการเตรียมตัวอย่าง
ใช้เครื่องโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) (KNAUER, เยอรมนี) ที่ติดตั้งเครื่องตรวจจับ UV เงื่อนไขการวิเคราะห์ HPLC มีดังนี้: ใช้ระบบ UHPLC Ultimate ที่ติดตั้งคอลัมน์วิเคราะห์ ODS-3 C18 (4.6 มม. × 250 มม., ขนาดอนุภาค 5 μm) (MZ, เยอรมนี) ตัวทำละลาย (เฟสเคลื่อนที่) ของ HPLC คือส่วนผสมของ TFA/เมทานอล (450:50 มล.) ด้วยอัตราการไหล 1 มล./นาที ความยาวคลื่นในการตรวจจับคือ 242 นาโนเมตร ปริมาตรการฉีดคือ 100 μL อุณหภูมิคอลัมน์คือ 20 °C เนื่องจากเวลาการคงตัวของยาค่อนข้างนาน (15 นาที) การฉีดครั้งต่อไปควรทำหลังจาก 25 นาที การระบุเมลามีนทำได้โดยการเปรียบเทียบเวลาการคงตัวและจุดสูงสุดของสเปกตรัม UV ของสารมาตรฐานเมลามีน
เตรียมสารละลายมาตรฐานของเมลามีน (10 μg/mL) โดยใช้น้ำและเก็บไว้ในตู้เย็น (4 °C) ให้พ้นแสง เจือจางสารละลายเข้มข้นด้วยเฟสเคลื่อนที่และเตรียมสารละลายมาตรฐานสำหรับใช้งาน ฉีดสารละลายมาตรฐานแต่ละชนิดเข้าเครื่อง HPLC จำนวน 7 ครั้ง คำนวณสมการการสอบเทียบ 10 โดยการวิเคราะห์การถดถอยของพื้นที่พีคที่กำหนดและความเข้มข้นที่กำหนด
นมผงสำเร็จรูป (20 ตัวอย่าง) และนมผงสำหรับทารกยี่ห้อต่างๆ (20 ตัวอย่าง) ถูกซื้อจากซูเปอร์มาร์เก็ตและร้านขายยาในประเทศอิหร่าน เพื่อใช้เลี้ยงทารกในกลุ่มอายุต่างๆ (0–6 เดือน, 6–12 เดือน และ >12 เดือน) และเก็บรักษาไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 °C จนกว่าจะถึงเวลาวิเคราะห์ จากนั้น ชั่งนมผงโฮโมจีไนซ์ 1 ± 0.01 กรัม ผสมกับอะซีโตไนไตรล์:น้ำ (50:50, v/v; 5 มล.) คนส่วนผสมเป็นเวลา 1 นาที จากนั้นนำไปผ่านกระบวนการอัลตราโซนิกในอ่างอัลตราโซนิกเป็นเวลา 30 นาที และสุดท้ายเขย่าเป็นเวลา 1 นาที จากนั้นนำส่วนผสมไปปั่นเหวี่ยงที่ 9000 × g เป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และกรองส่วนที่เป็นของเหลวใสลงในหลอดตัวอย่างอัตโนมัติขนาด 2 มล. โดยใช้ตัวกรองแบบเข็มฉีดยาขนาด 0.45 μm จากนั้นนำสารละลายที่กรองแล้ว (250 ไมโครลิตร) มาผสมกับน้ำ (750 ไมโครลิตร) แล้วฉีดเข้าไปในระบบ HPLC10,42
เพื่อตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการ เราได้ทำการหาค่าการฟื้นตัว ความแม่นยำ ขีดจำกัดการตรวจจับ (LOD) ขีดจำกัดการหาปริมาณ (LOQ) และความเที่ยงตรงภายใต้สภาวะที่เหมาะสม โดยกำหนดให้ LOD คือปริมาณตัวอย่างที่มีความสูงของพีคมากกว่าระดับสัญญาณรบกวนพื้นฐานสามเท่า ในขณะที่ LOQ คือปริมาณตัวอย่างที่มีความสูงของพีคมากกว่าอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนสิบเท่า
การตอบสนองของอุปกรณ์ถูกกำหนดโดยใช้กราฟสอบเทียบที่ประกอบด้วยจุดข้อมูลเจ็ดจุด โดยใช้ปริมาณเมลามีนที่แตกต่างกัน (0, 0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1 และ 1.2) ได้มีการตรวจสอบความเป็นเส้นตรงของกระบวนการคำนวณเมลามีน นอกจากนี้ ยังได้เติมเมลามีนในระดับต่างๆ ลงในตัวอย่างเปล่า กราฟสอบเทียบถูกสร้างขึ้นโดยการฉีดสารละลายเมลามีนมาตรฐาน 0.1–1.2 μg mL−1 อย่างต่อเนื่องลงในตัวอย่างนมผงสำหรับทารกและนมผง และได้ค่า R2 = 0.9925 ความถูกต้องถูกประเมินโดยความสามารถในการทำซ้ำและความสามารถในการสร้างผลลัพธ์ซ้ำของกระบวนการ โดยการฉีดตัวอย่างในวันแรกและอีกสามวันถัดไป (ทำซ้ำสามครั้ง) ความสามารถในการทำซ้ำของวิธีการถูกประเมินโดยการคำนวณค่า RSD % สำหรับความเข้มข้นของเมลามีนที่เติมลงไปสามระดับที่แตกต่างกัน ได้ทำการศึกษาการฟื้นตัวเพื่อกำหนดความแม่นยำ ระดับการฟื้นตัวโดยวิธีการสกัดคำนวณที่ระดับความเข้มข้นของเมลามีน 3 ระดับ (0.1, 1.2, 2) ในตัวอย่างนมผงสำหรับทารกและนมผง9,11,15
ปริมาณสารอาหารที่ควรได้รับต่อวันโดยประมาณ (EDI) คำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้: EDI = Ci × Cc/BW
โดยที่ Ci คือปริมาณเมลามีนเฉลี่ย Cc คือปริมาณการบริโภคนม และ BW คือน้ำหนักเฉลี่ยของเด็ก
การวิเคราะห์ข้อมูลดำเนินการโดยใช้โปรแกรม SPSS เวอร์ชัน 24 มีการทดสอบความปกติของข้อมูลโดยใช้การทดสอบ Kolmogorov-Smirnov ข้อมูลทั้งหมดเป็นข้อมูลที่ไม่เป็นไปตามการแจกแจงแบบปกติ (p = 0) ดังนั้นจึงใช้การทดสอบ Kruskal-Wallis และการทดสอบ Mann-Whitney เพื่อหาความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่ม
Ingelfinger, Jr. เมลามีนและผลกระทบต่อการปนเปื้อนอาหารทั่วโลก New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008)
Lynch, RA และคณะ ผลของค่า pH ต่อการเคลื่อนตัวของเมลามีนในชามสำหรับเด็ก วารสารนานาชาติว่าด้วยการปนเปื้อนของอาหาร 2, 1–8 (2015)
Barrett, MP และ Gilbert, IH การกำหนดเป้าหมายสารประกอบที่เป็นพิษไปยังส่วนภายในของไทรพาโนโซม ความก้าวหน้าในปรสิตวิทยา 63, 125–183 (2006)
Nirman, MF และคณะ การประเมินเดนดริเมอร์เมลามีนในหลอดทดลองและในร่างกายในฐานะพาหะนำส่งยา วารสารเภสัชศาสตร์นานาชาติ 281(1–2), 129–132(2004)
องค์การอนามัยโลก การประชุมผู้เชี่ยวชาญครั้งที่ 1-4 เพื่อทบทวนด้านพิษวิทยาของเมลามีนและกรดไซยานูริก (2008)
Howe, AK-C., Kwan, TH และ Lee, PK-T. พิษของเมลามีนและไต วารสารของสมาคมโรคไตแห่งอเมริกา 20(2), 245–250 (2009)
Ozturk, S. และ Demir, N. การพัฒนาสารดูดซับ IMAC ใหม่สำหรับการระบุเมลามีนในผลิตภัณฑ์นมโดยใช้โครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) วารสารการสังเคราะห์และการวิเคราะห์อาหาร 100, 103931 (2021)
Chansuvarn, V., Panic, S. และ Imim, A. การหาปริมาณเมลามีนในนมเหลวด้วยวิธีสเปกโทรโฟโตเมตรีอย่างง่ายโดยอาศัยปฏิกิริยา Mannich green Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. และ El-Habib, R. การหาปริมาณเมลามีนในนมผงสำหรับทารก นมผง และตัวอย่างปลาแพงกาเซียสโดยวิธีโครมาโทกราฟี HPLC/ไดโอดอาร์เรย์ วารสารพิษวิทยาเชิงวิเคราะห์สิ่งแวดล้อม, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012)
Skinner, KG, Thomas, JD และ Osterloh, JD พิษของเมลามีน วารสารพิษวิทยาทางการแพทย์ 6, 50–55 (2010)
องค์การอนามัยโลก (WHO), พิษวิทยาและแง่มุมด้านสุขภาพของเมลามีนและกรดไซยานูริก: รายงานการประชุมผู้เชี่ยวชาญร่วมมือระหว่าง WHO และ FAO โดยได้รับการสนับสนุนจากกระทรวงสาธารณสุขแคนาดา ออตตาวา ประเทศแคนาดา 1-4 ธันวาคม 2551 (2009)
Korma, SA และคณะ การศึกษาเปรียบเทียบองค์ประกอบไขมันและคุณภาพของนมผงสำหรับทารกที่มีไขมันโครงสร้างเชิงฟังก์ชันชนิดใหม่และนมผงสำหรับทารกเชิงพาณิชย์ European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020)
El-Waseef, M. และ Hashem, H. การเพิ่มคุณค่าทางโภชนาการ คุณลักษณะด้านคุณภาพ และอายุการเก็บรักษาของนมผงสำหรับทารกโดยใช้น้ำมันปาล์ม วารสารวิจัยการเกษตรตะวันออกกลาง 6, 274–281 (2017)
Yin, W. และคณะ การผลิตแอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้านเมลามีนและการพัฒนาวิธี ELISA แบบแข่งขันทางอ้อมสำหรับการตรวจหาเมลามีนในนมดิบ นมผง และอาหารสัตว์ วารสารเคมีเกษตรและอาหาร 58(14), 8152–8157 (2010)